Question

【題目】回答下列（一）、（二）小題：

（一）某些土壤細(xì)菌可將尿素分解，供植物利用，回答與微生物培養(yǎng)有關(guān)的問題：

（1） 用來篩選分解尿素細(xì)菌的培養(yǎng)基添加______作為凝固劑，培養(yǎng)基中K2HP04的作用是 ______（答出兩點）。

（2）因尿素加熱會分解，因此使用G6玻璃砂漏斗進行過濾，漏斗在使用后需用________________浸泡，抽濾去除后再用蒸憾水洗至洗岀液為中性，干燥后保存。其他物質(zhì)及器材在使用高壓蒸汽滅菌鍋進行滅菌時，下面操作正確的是______________（ A滅菌鍋內(nèi)放入的物品應(yīng)盡量排滿實 B. LB培養(yǎng)基可分裝至培養(yǎng)血中進行滅菌 C.移液管滅菌前應(yīng)在其上端用鑷子子放入少量脫脂棉 D.三角刮刀、接種環(huán)、G6玻璃砂漏斗皆可進行高壓蒸汽滅菌）

（3）能分解尿素的細(xì)菌不能以尿素的分解產(chǎn)物CO2作為碳源，原因是________________。但可用葡萄糖作為碳源，進入細(xì)菌體內(nèi)的葡萄癇除了可為細(xì)胞生命活動提供能量，還可以______________。在4個細(xì)菌培養(yǎng)基平板上，均接種稀釋度為10-5的土壤稀釋液0.1ml，培養(yǎng)一段時間后，平板上長出的細(xì)菌菌落數(shù)分別為13、156、178和191，則土壤稀釋液中的細(xì)菌密度為_________________。

（二）單克隆抗體應(yīng)用比較廣泛，經(jīng)抗原免疫的小鼠脾細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合后制備的鼠源單抗，會引起人體的不良反應(yīng)。科學(xué)家通過對鼠和人控制抗體合成的基因進行拼接，實現(xiàn)了對鼠源單抗的改造。下圖表示形成鼠-人嵌合抗體的過程。請據(jù)圖回答：

（1）制備鼠源單抗時，需每隔2周用抗原注射小鼠一次，共注射三次，其目的是產(chǎn)生更多的_______________ 。需要將雜交瘤細(xì)胞接種到多孔培養(yǎng)板上，進行抗體陽性檢測，之后稀釋、培養(yǎng)、再檢測，并多次重復(fù)上述操作，其目的是篩選______的雜交瘤細(xì)胞。雜交細(xì)胞培養(yǎng)過程中，為防止有害代謝物的積累，可采用______的方法。

（2）構(gòu)建人鼠嵌合抗體基因時，需從小鼠雜交瘤細(xì)胞____________篩選序列未知的可變區(qū)基因，再釣取人抗體恒定區(qū)基因，然后利用__________酶將兩者拼接。

（3）嵌合抗體作為一種較為成熟的慕因工程抗體，其__________性和親和力依賴于能否準(zhǔn)確獲取可變區(qū)基因，而其表達水平主要取決于表達載體和宿主細(xì)胞。下列表達系統(tǒng)不屬于嵌合抗體宿主細(xì)胞的最佳選擇的是__________。（A.大腸桿菌 B. HeLa細(xì)胞C.小鼠骨髓瘤細(xì)胞 D.小鼠成纖維細(xì)胞）

Answer 1

【答案】瓊脂糖 提供無機營養(yǎng)、保持pH穩(wěn)定 HC1 D 分解尿素的細(xì)菌是異養(yǎng)生物 提供原料（或碳骨架） 1.75×108個/ml 效應(yīng)B細(xì)胞（漿細(xì)胞或淋巴細(xì)胞） 能產(chǎn)生特定抗體 更換培養(yǎng)液 基因文庫 限制性核酸內(nèi)切酶、DNA連接酶 特異 A

【解析】

培養(yǎng)基的成分：水、碳源、氮源、無機鹽、生長因子等。

篩選分解尿素的微生物應(yīng)該用以尿素為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基進行篩選。

常用的滅菌方法：干熱滅菌法、灼燒滅菌法、高壓蒸汽滅菌法等。

基因工程的工具：限制酶、DNA連接酶和運載體。

單克隆抗體制備的過程中，需要經(jīng)過瘤細(xì)胞和漿細(xì)胞的融合，該過程需要經(jīng)過選擇培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞和專一抗體檢測篩選出能分泌專一抗體的雜交瘤細(xì)胞，最后經(jīng)過體內(nèi)或體外動物細(xì)胞培養(yǎng)，可以獲得大量的雜交瘤細(xì)胞和單克隆抗體。

（一）（1）培養(yǎng)基中常加入瓊脂糖作為凝固劑制作固體培養(yǎng)基。培養(yǎng)基中K2HPO4可以提供無機營養(yǎng)、保持pH穩(wěn)定。

（2）因尿素加熱會分解，因此使用G6玻璃砂漏斗進行過濾，漏斗在使用后需用HC1浸泡，抽濾去除去酸，再用蒸餾水洗至洗岀液為中性，干燥后保存。其他物質(zhì)及器材在使用高壓蒸汽滅菌鍋進行滅菌時，

A、待滅菌的物質(zhì)放置不宜過緊，A錯誤；

B、LB培養(yǎng)基應(yīng)該先滅菌，再在超凈工作臺上分裝到培養(yǎng)皿中，B錯誤；

C、脫脂棉吸水后容易引起污染，故不能用脫脂棉，C錯誤；

D、三角刮刀、接種環(huán)、G6玻璃砂漏斗皆可進行高壓蒸汽滅菌，D正確。

故選D。

（3）能分解尿素的細(xì)菌是異養(yǎng)生物，不能利用CO2作為碳源，需要利用有機物如葡萄糖作為碳源。葡萄糖可為細(xì)胞生命活動提供能量，還可以為其他物質(zhì)的合成提供原料。在4個細(xì)菌培養(yǎng)基平板上，均接種稀釋度為105的土壤稀釋液0.1ml，培養(yǎng)一段時間后，平板上長岀的細(xì)菌菌落數(shù)分別為13、156、178和191，進行計數(shù)時應(yīng)該選擇數(shù)目在30-300之間的菌落，故土壤稀釋液中的細(xì)菌密度為：（156+178+191）÷3÷0.1×105=1.75×108個/ml。

（二）（1）制備鼠源單抗時，三次注射抗原是為了產(chǎn)生更多的漿細(xì)胞。把雜交瘤細(xì)胞接種到多孔培養(yǎng)板上，進行抗體陽性檢測，是為了篩選能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞，篩選出的雜交瘤細(xì)胞可以進行體內(nèi)或體外培養(yǎng)，細(xì)胞培養(yǎng)過程中，可以通過更換培養(yǎng)液來防止有害代謝物的積累。

（2）嵌合抗體是由鼠抗體的可變區(qū)和人抗體的恒定區(qū)重組而成，故構(gòu)建人鼠嵌合抗體基因時，可以從小鼠雜交瘤細(xì)胞基因文庫篩選序列未知的可變區(qū)基因，再釣取人抗體恒定區(qū)基因，利用限制酶和DNA連接酶將兩者拼接重組，將鼠源抗體改造成鼠-人嵌合抗體基因。

（3）嵌合抗體的特異性和親和力依賴于能否準(zhǔn)確獲取可變區(qū)基因，而其表達水平主要取決于表達載體和宿主細(xì)胞。嵌合抗體在核糖體合成，需要經(jīng)過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體的加工，故可以選擇HeLa細(xì)胞、小鼠骨髓瘤細(xì)胞、小鼠成纖維細(xì)胞等真核細(xì)胞作為受體細(xì)胞，大腸桿菌是原核細(xì)胞，不含有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體，不能對抗體進行加工，不適宜作為嵌合抗體宿主細(xì)胞的最佳選擇。故選A。