Question

【題目】（生物技術(shù)實(shí)踐）

尿素是一種重要的農(nóng)業(yè)氮肥，但不能被農(nóng)作物直接吸收，土壤中有一種好氧型細(xì)菌能把尿素分解成氨。欲從土壤中篩選出能分解尿素的細(xì)菌并予以純化計(jì)數(shù)，采用了如圖所示的基本操作流程。

請(qǐng)回答下列問題：

（1）有些細(xì)菌能分解尿素，有些細(xì)菌則不能，原因是前者能產(chǎn)生______________。

（2）能在該選擇培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的細(xì)菌______________（填“一定”或“不一定”）都能分解尿素，若在平板中加入酚紅，目的菌落出現(xiàn)的變化是_______________。

（3）篩選得到的菌落可以采用平板劃線法進(jìn)一步純化,每次劃線后接種環(huán)必須____________，才能再次用于劃線。純化獲得的菌種可以保存在試管中，塞上棉塞或蓋上封口膜，不能密封，原因是_____________________。

（4）用來篩選分解尿素細(xì)菌的培養(yǎng)基含有和，其作用有__________________。（答出兩點(diǎn)）

Answer 1

【答案】脲酶 不一定 周圍指示劑變紅(或周圍出現(xiàn)紅圈) 灼燒并冷卻 細(xì)菌有氧呼吸需要?dú)怏w流通 為細(xì)菌生長(zhǎng)提供無機(jī)營(yíng)養(yǎng)，作為緩沖劑保持細(xì)胞生長(zhǎng)過程中PH穩(wěn)定

【解析】

1、欲從土壤中篩選出能分解尿素（產(chǎn)生脲酶）的細(xì)菌，所用培養(yǎng)基必須以尿素為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基；尿素分解菌在該選擇培養(yǎng)基上能產(chǎn)生脲酶；尿素分解菌產(chǎn)生的脲酶能將尿素分解成氨，氨是堿性物質(zhì)，可使酚紅指示劑變紅。

2、微生物常見的接種的方法：①平板劃線法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)；在線的開始部分，微生物往往連在一起生長(zhǎng)，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個(gè)菌落。

②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個(gè)菌落。

（1）根據(jù)以上分析可知，尿素分解菌能夠產(chǎn)生脲酶將尿素分解為氨，而不能產(chǎn)生脲酶的細(xì)菌不能利用尿素為氮源。

（2）由于固氮菌也能在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，所以在該選擇培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的細(xì)菌不一定都能產(chǎn)生脲酶；尿素分解菌產(chǎn)生的脲酶能將尿素分解成氨，氨是堿性物質(zhì)，可使酚紅指示劑變紅。

（3）采用平板劃線法進(jìn)一步純化時(shí)，每次劃線后接種環(huán)必須灼燒并冷卻，才能再次用于劃線。純化獲得的尿素分解菌是一種好氧型細(xì)菌，其有氧呼吸需要?dú)怏w流通，故將該菌種保存在試管中時(shí)不能密封。

（4）用來篩選分解尿素細(xì)菌的培養(yǎng)基含有KH2PO4和Na2HPO4，一是其作為無機(jī)鹽可以為細(xì)菌生長(zhǎng)提供無機(jī)營(yíng)養(yǎng)，二是作為緩沖劑保持細(xì)胞生長(zhǎng)過程中PH穩(wěn)定。