Question

【題目】圖1表示含有目的基因D的DNA片段長(zhǎng)度（bp即堿基對(duì)）和部分堿基序列，圖2表示一種質(zhì)粒的結(jié)構(gòu)和部分堿基序列，現(xiàn)有MspI、BamHI、MboI、SmaI 4種限制性核酸內(nèi)切酶切割的堿基序列和酶切位點(diǎn)分別為C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG，請(qǐng)回答下列問(wèn)題：

（1）若用限制酶SmaI完全切割圖1中DNA片段，其產(chǎn)物長(zhǎng)度為_____________。

（2）若圖1中虛線方框內(nèi)的堿基對(duì)被T-A堿基對(duì)替換，那么基因D就突變?yōu)榛��?/span>d。從隱性純合子分離出圖1及其對(duì)應(yīng)的DNA片段，用限制酶SmaI完全切割，產(chǎn)物中共有____種不同DNA片段。為了提高實(shí)驗(yàn)成功率，需要通過(guò)_________技術(shù)擴(kuò)增目的基因，以獲得大量的目的基因。

（3）若將圖2中質(zhì)粒和目的基因D通過(guò)同種限制酶處理后進(jìn)行，形成重組質(zhì)粒，那么應(yīng)選用的限制酶是______________。在導(dǎo)入重組質(zhì)粒后，為了篩選出含質(zhì)粒的大腸桿菌，一般先用添加_________的培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，然后將生長(zhǎng)的菌接種到只含____________的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，可進(jìn)一步篩選出含重組質(zhì)粒的受體細(xì)胞。

（4）假設(shè)用BamHI切割DNA獲取目的基因，用MboI切割質(zhì)粒，然后形成重組質(zhì)粒，若將插入在抗生素B抗性基因處的目的基因重新切割下來(lái)，能否用BamHI? _____（能，不能，不一定）。因?yàn)槟康幕�因和抗生�?/span>B抗性基因拼接處_______________。

Answer 1

【答案】537bp、790bp、661bp 兩 PCR BamHⅠ 抗生素B 抗生素A 不一定 不一定出現(xiàn)GGATCC

【解析】

分析題圖：外源DNA含有BamHI、MboI、SmaI3種限制性核酸內(nèi)切酶的識(shí)別序列，其中限制酶MspⅠ和SmaⅠ的切割位點(diǎn)在目的基因上。質(zhì)粒含有MspI、BamHI、MboI3種限制性核酸內(nèi)切酶的識(shí)別序列，其中BamHI酶的切割位點(diǎn)位于抗生素A的抗性基因上；MboI酶的切割位點(diǎn)位于抗生素B和抗生素A的抗性基因上。

（1）圖1中DNA片段含有兩個(gè)SmaⅠ酶切位點(diǎn)，被SmaⅠ酶完全切割后出現(xiàn)三個(gè)長(zhǎng)度的片段，分別是537bp、790bp、661bp。

（2）D突變成d由于堿基對(duì)替換的位置發(fā)生在SmaⅠ的位置，所以基因d的序列中含有一個(gè)識(shí)別位點(diǎn)，經(jīng)過(guò)切割后會(huì)產(chǎn)生1327bp和661bp兩種長(zhǎng)度的片段。為了提高實(shí)驗(yàn)成功率，需要通過(guò)PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因，以獲得大量的目的基因。

（3）限制酶MspⅠ和SmaⅠ的切割位點(diǎn)位于目的基因D上，若用這兩種酶切割會(huì)被破壞目的基因D；運(yùn)載體的兩個(gè)標(biāo)記基因上都有限制酶MboⅠ的切割位點(diǎn)，用該酶切割會(huì)破壞這兩個(gè)標(biāo)記基因，因此只能選用限制酶BamHⅠ切割外源DNA分子和運(yùn)載體；用限制酶BamHⅠ切割質(zhì)粒會(huì)破壞抗生素A抗性基因，但不會(huì)破壞抗生素B抗性基因，所以導(dǎo)入重組質(zhì)粒的大腸桿菌能在含有抗生素B的培養(yǎng)基上生存，因此為了篩選出含重組質(zhì)粒的大腸桿菌，一般需要用添加抗生素B的培養(yǎng)基培養(yǎng)；然后將生長(zhǎng)的菌接種到只含抗生素A的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，可進(jìn)一步篩選出含重組質(zhì)粒的受體細(xì)胞。

（4）用BamHⅠ切割DNA獲取目的基因，用MboⅠ切割質(zhì)粒，然后形成重組質(zhì)粒，用BamHⅠ不一定將插入在抗生素B抗性基因處的目的基因重新切割下來(lái)，因?yàn)槟康幕�因和抗生�?/span>B抗性基因拼接處含有GATC，不一定出現(xiàn)GGATCC。