Question

【題目】下圖是轉(zhuǎn)基因獼猴培養(yǎng)過程示意圖，請據(jù)圖回答：

（1）獲取綠色熒光蛋白基因的方法包括____________、利用 PCR 技術(shù)擴增和用化學(xué)方法 直接人工合成等。基因工程的核心步驟是________________________用圖中數(shù)字表示），②過程常用的方法是________________________________________________。

（2）從分子水平檢測目的基因是否成功導(dǎo)入受體細胞的方法是__________________ 技術(shù)。

（3）利用 PCR 技術(shù)擴增目的基因的前提是要有一段已知的目的基因核苷酸序列，根據(jù)這 一序列設(shè)計并合成________________________________________________。

（4）從雌性獼猴體內(nèi)采集的卵母細胞，一般要培養(yǎng)到____________ 階段才能進行體外受 精。判斷卵子受精的重要標志是____________________________________。

（5）圖中過程⑦稱為____________ ，所用的早期胚胎通常是發(fā)育至____________ 期的胚 胎，受體雌猴對移入子宮的外來胚胎不會發(fā)生 ____________反應(yīng)，這為胚胎在受體雌猴體 內(nèi)的存活提供了可能。

Answer 1

【答案】從基因文庫中獲取 ① 顯微注射法 DNA分子雜交 （成對的）引物 減數(shù)第二次分裂中期（MⅡ中期） 在卵細胞膜和透明帶的間隙可以觀察到兩個極體 胚胎移植　 囊胚（或桑椹胚） 免疫排斥

【解析】

圖示為轉(zhuǎn)基因獼猴的培育過程示意圖。標記基因的作用：是為了鑒定受體細胞中是否含有目的基因，從而將含有目的基因的細胞篩選出來。

基因工程技術(shù)的基本步驟：目的基因的獲取→基因表達載體的構(gòu)建→將目的基因?qū)�入受體細胞→目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因用DNA分子雜交技術(shù)；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA用分子雜交技術(shù)；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)用抗原—抗體雜交技術(shù)。個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。

PCR是聚合酶鏈式反應(yīng)的縮寫，其擴增目的基因的原理是： DNA半保留復(fù)制的原理。擴增目的基因的前提是：要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根據(jù)這一序列合成（成對的）引物。反應(yīng)需要：模板DNA、四種脫氧核苷酸、一對引物、熱穩(wěn)定DNA聚合酶（Taq酶）。

胚胎移植，又稱受精卵移植，是指將雌性動物的早期胚胎，或者通過體外受精及其他方式得到的胚胎，移植到同種的、生理狀態(tài)相同的雌性動物體內(nèi)，使之繼續(xù)發(fā)育為新個體的技術(shù)。相關(guān)技術(shù)包括：同期發(fā)情、超數(shù)排卵、胚胎的收集和移植（卵母細胞的體外成熟、精子的體外獲能、體外受精、受精卵的體外培養(yǎng)和移植等一系列步驟）。

（1）綠色熒光蛋白基因為目的基因，獲取目的基因的方法包括：從基因文庫中獲取目的基因、利用PCR技術(shù)擴增目的基因和用化學(xué)方法直接人工合成等；基因工程的核心步驟是基因表達載體的構(gòu)建，即圖示中的①過程。②過程是將目的基因?qū)�入受精卵這一受體細胞，常用的方法是顯微注射法；

（2）目的基因的檢測與鑒定分為分子水平上的檢測和個體水平上的鑒定。分子水平檢測目的基因是否成功導(dǎo)入受體細胞的方法是DNA分子雜交技術(shù)；

（3）PCR擴增目的基因的前提是：要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根據(jù)這一序列合成（成對的）引物。

（4）受體細胞常選處在MⅡ中（減數(shù)第二次分裂中）期的去核卵母細胞，通過電脈沖（或電刺激）進行激活，使其完成減數(shù)分裂和發(fā)育進程；受精過程包括5個階段：1、精子穿過放射冠 2、精子穿過透明帶 3、精子進入卵黃 4、原核形成 5、配子融合。是否完成受精的標志是：在卵黃膜和透明帶的間隙可以觀察到二個極體；

（5）圖中過程⑦為胚胎移植，所用的早期胚胎通常是發(fā)育至桑椹胚或囊胚期的胚胎，由于胎盤屏障等原因，受體雌猴對移入子宮的外來胚胎不會發(fā)生免疫排斥反應(yīng)，這為胚胎在受體雌猴內(nèi)的存活提供了可能。