Question

（08江蘇卷）將動(dòng)物致病菌的抗原基因?qū)�入馬鈴薯制成植物疫苗，飼喂轉(zhuǎn)基因馬鈴薯可使動(dòng)物獲得免疫力。以下是與植物疫苗制備過(guò)程相關(guān)的圖和表。

請(qǐng)根據(jù)以上圖表回答下列問(wèn)題。

（1）在采用常規(guī)PCR方法擴(kuò)增目的基因的過(guò)程中，使用的DNA聚合酶不同于一般生物體內(nèi)的DNA聚合酶，其最主要的特點(diǎn)是                          。

（2）PCR過(guò)程中退火（復(fù)性）溫度必須根據(jù)引物的堿基數(shù)量和種類(lèi)來(lái)設(shè)定。表1為根據(jù)模板設(shè)計(jì)的兩對(duì)引物序列，圖2為引物對(duì)與模板結(jié)合示意圖。請(qǐng)判斷哪一對(duì)引物可采用較高的退火溫度？__________。

（3）圖1步驟③所用的DNA連接酶對(duì)所連接的DNA兩端堿基序列是否有專(zhuān)一性？              。

（4）為將外源基因轉(zhuǎn)入馬鈴薯，圖1步驟⑥轉(zhuǎn)基因所用的細(xì)菌B通常為               。

（5）對(duì)符合設(shè)計(jì)要求的重組質(zhì)粒T進(jìn)行酶切，。假設(shè)所用的酶均可將識(shí)別位點(diǎn)完全切開(kāi)，請(qǐng)根據(jù)圖1中標(biāo)示的酶切位點(diǎn)和表2所列的識(shí)別序列，對(duì)以下酶切結(jié)果作出判斷。

①采用EcoRⅠ和PstⅠ酶切，得到_________種DNA片斷。

②采用EcoRⅠ和SmaⅠ酶切，得到_________種DNA片斷。

Answer 1

答案：（1）耐高溫 

 （2）引物對(duì)B 

 （3）否 

 （4）農(nóng)桿菌 

 （5）①2  ②1

解析：（1） PCR方法擴(kuò)增目的基因的過(guò)程中，使用的DNA聚合酶具有耐高溫的特性。（2）引物B中含C與G的堿基對(duì)較多，可采用較高的退火溫度。（3）多種限制酶切割，形成不同的切割位點(diǎn)，所用的DNA連接酶對(duì)所連接的DNA兩端堿基序列就沒(méi)有專(zhuān)一性要求。（4）植物基因工程中常用農(nóng)桿菌做受體細(xì)胞。（5）據(jù)圖分析，用到了EcoR I酶和Alu I酶切割抗原DNA片段產(chǎn)生了X、Y兩個(gè)片段，而用EcoR I酶和SmaI酶切割質(zhì)粒產(chǎn)生了 M、N兩個(gè)片段，且M、N片段間存在Pst I酶切點(diǎn)。因此再用EcoRⅠ和PstⅠ酶切割這兩片段形成的重組質(zhì)粒，由于保留了Pstl的切割位點(diǎn)，所以可以得到兩種DNA分子。而用EcoRⅠ和SmaⅠ酶切重組質(zhì)粒中，如圖I-②過(guò)程只能產(chǎn)生一種DNA片斷。

點(diǎn)評(píng)：本題考查運(yùn)用PCR方法擴(kuò)增目的基因的有關(guān)知識(shí)以及圖解的識(shí)別能力，尤其是限制酶的作用是解答本題的難點(diǎn)和關(guān)鍵點(diǎn)。