Question

17．在生產(chǎn)研究上，常常需要進行微生物的培養(yǎng)和計數(shù)．回答下列與微生物的培養(yǎng)與利用有關(guān)的問題：
（1）如圖是利用平板劃線法法將微生物接種到固體培養(yǎng)基上，把混合的菌種逐步稀釋分散獲得單個菌落．接種后培養(yǎng)基應(yīng)倒置放在37℃恒溫培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)．
（2）分析下面培養(yǎng)基的配方：NaNO₃、KH₂PO₄、NaH₂PO₄、MgSO₄•7H₂O、KCl、H₂O．若此培養(yǎng)基用于篩選尿素分解菌，則應(yīng)除去上述培養(yǎng)基成分中的NaNO₃，并加入尿素和葡萄糖，以補充其生活所需的氮源和碳源培養(yǎng)基中加入酚紅作指示劑的原因是尿素分解菌能合成脲酶將尿素分解為氨，使培養(yǎng)基pH發(fā)生改變，酚紅由黃變紅，使菌落周圍呈現(xiàn)紅色．
（3）三位同學用稀釋涂布平板法測定同一土壤樣品中細菌數(shù)量．在對應(yīng)稀釋倍數(shù)為106的培養(yǎng)基中，取0.2ml稀釋液涂布，得到以下統(tǒng)計結(jié)果：
甲同學涂布了1個平板，統(tǒng)計的菌落數(shù)是260；
乙同學涂布了三個平板，統(tǒng)計的菌落數(shù)是210、240和246，取平均值232；
丙同學涂布了三個平板，統(tǒng)計的菌落數(shù)是21、212和256，取平均值163；
在三位同學的統(tǒng)計中乙同學的統(tǒng)計結(jié)果是相對準確可信的．按照該同學的結(jié)果，每毫升原液中的菌體數(shù)是1.16×10⁹．
（4）實驗結(jié)束后，使用過的培養(yǎng)基應(yīng)該進行滅菌處理后，才能倒掉．
（5）用這種方法測定密度，實際活菌數(shù)量要比測得的數(shù)量少，因為當兩個或多個細胞連在一起時，平板上觀察的是一個菌落．

Answer 1

分析 1、據(jù)圖分析；圖示接種方法為平板劃線法．微生物的接種方法主要有稀釋涂布平板法和平板劃線法．篩選目的微生物應(yīng)該使用選擇培養(yǎng)基．培養(yǎng)基中應(yīng)該有滿足目的微生物生活的碳源、氮源水和無機鹽等物質(zhì)．
2、平板劃線法是接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的造作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基表面，在數(shù)次劃線之后培養(yǎng)，可以分離到由一個細胞繁殖而來的子細胞群體-菌落；為了得到由一個細胞繁殖而來的菌落，劃線時應(yīng)注意：第二次及以后的每次劃線前要灼燒接種環(huán)，冷卻后從上一區(qū)劃線末端開始化，首尾區(qū)的劃線不能相接．

解答 解：（1）右圖是利用平板劃線法將微生物接種到固體培養(yǎng)基上，把混合的菌種逐步稀釋分散獲得單個菌落．接種后培養(yǎng)基應(yīng)倒置放在37℃恒溫培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)．
（2）培養(yǎng)分解尿素的細菌，其氮源是尿素，所以培養(yǎng)基中要除去含氮物質(zhì)，即去除NaNO₃，并加入尿素和葡萄糖，以提供氮源和碳源．培養(yǎng)基中加入酚紅作指示劑的原因是尿素分解菌能合成脲酶將尿素分解為氨，使培養(yǎng)基pH發(fā)生改變，酚紅由黃變紅，使菌落周圍呈現(xiàn)紅色．
（3）在三位同學的統(tǒng)計中，乙同學的統(tǒng)計結(jié)果是相對準確可信的．按照該同學的結(jié)果，每克樣品中的菌落數(shù)=平板上菌落數(shù)的平均值÷體積×稀釋倍數(shù)=233÷0.2×10⁶=1.165×10⁹．
（4）實驗結(jié)束后，使用過的培養(yǎng)基應(yīng)該進行滅菌處理后，才能倒掉．
（5）當兩個或多個細胞連在一起時，平板上觀察的是一個菌落，因此用這種方法測得的菌體數(shù)比實際活菌數(shù)量少．
故答案為：
（1）平板劃線法             倒置
（2）NaNO₃       尿素       葡萄糖        氮源       碳源（要求：前后對應(yīng)）  脲酶
（3）乙         1.16×10⁹      
（4）滅菌
（5）少    當兩個或多個細胞連在一起時，平板上觀察的是一個菌落

點評 本題考查微生物的分離和培養(yǎng)、測定某種微生物的數(shù)量等知識，要求考生識記培養(yǎng)基的成分和微生物的接種方法，并能準確判斷圖中的接種方法；能采用稀釋涂布平板法對微生物進行計數(shù)，并能對實驗結(jié)果進行分析和簡單的計算．