Question

【題目】草甘膦的除草機制是抑制植物體內EPSPS酶的合成，最終導致植物死亡。但它的使用有時也會影響到農作物的正常生長。目前，已發(fā)現可以從一種抗草甘膦的大腸桿菌突變株中分離出EPSPS基因，若將該基因轉入農作物植物細胞內，從而獲得的轉基因植物就能耐受高濃度的草甘膦。

（1）將圖1①的DNA用HindⅢ、BamHⅠ完全酶切后，反應管中有 種DNA片段。

（2）假設圖1中質粒原來BamHⅠ識別位點的堿基序列變?yōu)榱肆硪环N限制酶BclⅠ的堿基序列，現用BclⅠ和HindⅢ切割質粒，則該圖1中①的DNA右側還能選擇BamHⅠ進行切割，并獲得所需重組質粒嗎？______ 請說明理由 。

（3）若上述假設成立，并成功形成重組質粒，則重組質粒( )

A．既能被BamHⅠ也能被HindⅢ切開

B．能被BamHⅠ但不能被HindⅢ切開

C．既不能被BamHⅠ也不能被HindⅢ切開

D．能被HindⅢ但不能被BamHⅠ切開

(4）要想檢測導入的EPSPS基因是否表達，在分子水平上可用 方法進行檢測。

Answer 1

【答案】（1）4 （2）能 切割后露出的黏性末端相同 （3）D （4）抗原-抗體雜交

【解析】（1）由于上述兩種酶形成的末端不一樣，所以被兩種不同的限制酶切割之后所形成的片段有AA、AB、BA、BB四種切法形成的四種片段。（2）設A表示HindⅢ，B表示BamHⅠ。同時被兩種限制酶切割有兩種不同的目的基因，即AB和BA，所以重組質粒有兩種。Bstl與BamHⅠ酶切割的末端一樣，所以同時用這兩種限制酶切割只能形成一種目的基因，所以只能形成一種重組質粒，重組質粒的形成需用DNA連接酶將目的與質粒相連；質粒要進行復制才能更多的表達出產物，所以重組之后要能復制。（3）根據酶切位點和識別的堿基序列可知，重組質粒只能被能被HindⅢ但不能被BamHⅠ切開。（4）從圖22可知，a鏈形成是以DNA一條鏈作為模板進行轉錄形成的信使RNA分子，不同組織細胞的相同DNA在轉錄時，如果是相同基因一般轉錄起點相同，不同的基因轉錄起點不同，檢測目的基因是否在受體細胞內表達的分子水平上的檢測是向分泌物中加入抗體，通過抗原—抗體特異性結合形成雜交帶加以檢測，如果能形成，說明表達了，如果不能形成，說明沒有表達。