Question

2．胰島B細(xì)胞移植是一種有效治療糖尿病的方法．利用小鼠再生胰腺提取物（RPE）可定向誘導(dǎo)人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞（hAMSCs）分化成胰島B細(xì)胞．請(qǐng)回答下列問(wèn)題：

（1）取人羊膜組織刮除血塊、上皮細(xì)胞，沖洗后剪碎，然后用胰蛋白酶處理，去除細(xì)胞表面（糖）蛋白，使細(xì)胞分散開(kāi)，最終制成hAMSCs懸液．將細(xì)胞懸液放入培養(yǎng)瓶中進(jìn)行原代培養(yǎng)，先后出現(xiàn)細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)、接觸抑制現(xiàn)象象，直至細(xì)胞停止分裂增殖，這時(shí)需要將細(xì)胞進(jìn)行相關(guān)處理，然后進(jìn)行傳代培養(yǎng)．
（2）取傳至第3代的hAMSCs放入細(xì)胞培養(yǎng)板，同時(shí)加入RPE進(jìn)行誘導(dǎo)分化培養(yǎng)．該代hAMSCs能保持細(xì)胞正常的（二倍體）核型．誘導(dǎo)分化培養(yǎng)15天后，提取細(xì)胞的RNA（或mRNA），用胰島素基因探針進(jìn)行分子雜交，可初步檢測(cè)hAMSCs是否分化成胰島B細(xì)胞．
（3）用人的雜交瘤細(xì)胞來(lái)生產(chǎn)人源單克隆抗體難以成功，因此單克隆抗體大都來(lái)自鼠源．但鼠源單抗在人體內(nèi)使用，會(huì)產(chǎn)生較強(qiáng)的免疫原性，為解決這一問(wèn)題，發(fā)明了嵌合抗體．大致過(guò)程如圖所示，嵌合抗體能降低鼠源抗體的免疫原性，從圖中可以推測(cè)，免疫原性的產(chǎn)生主要與抗體的C（選填“V區(qū)”、“C區(qū)”）有關(guān)．構(gòu)建的人鼠嵌合抗體基因表達(dá)載體除了標(biāo)記基因和目的基因外，還有啟動(dòng)子、終止子．
（4）科學(xué)家們用細(xì)胞融合實(shí)驗(yàn)證明，分化的細(xì)胞中存在“閑置不用”的結(jié)構(gòu)基因．他們把大鼠肝腫瘤細(xì)胞和小鼠成纖維細(xì)胞融合成雜交瘤細(xì)胞，篩選出含有兩套肝細(xì)胞染色體和一套成纖維細(xì)胞染色體的細(xì)胞．這些細(xì)胞既保持了合成大鼠肝細(xì)胞3種特異蛋白的能力，也合成了小鼠干細(xì)胞的這3種蛋白，但是在正常的小鼠成纖維細(xì)胞中從不合成這些．由此可見(jiàn)，融合實(shí)驗(yàn)證明了小鼠成纖維細(xì)胞含有不表達(dá)的但肝細(xì)胞專(zhuān)一表達(dá)的基因，在特定條件下這些“閑置基因”也可表達(dá)．

Answer 1

分析 1、蛋白質(zhì)工程指以蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)規(guī)律及其與生物功能的關(guān)系作為基礎(chǔ)，通過(guò)基因修飾或基因合成，對(duì)現(xiàn)有蛋白質(zhì)進(jìn)行基因改造，或制造一種新的蛋白質(zhì)，以滿(mǎn)足人類(lèi)的生產(chǎn)和生活的需要．
2、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的過(guò)程：取動(dòng)物組織塊→剪碎組織→用胰蛋白酶處理分散成單個(gè)細(xì)胞→制成細(xì)胞懸液→轉(zhuǎn)入培養(yǎng)液中（原代培養(yǎng)）→放入二氧化碳培養(yǎng)箱培養(yǎng)→貼滿(mǎn)瓶壁的細(xì)胞用酶分散為單個(gè)細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液→轉(zhuǎn)入培養(yǎng)液（傳代培養(yǎng)）→放入二氧化碳培養(yǎng)箱培養(yǎng)．

解答 解：（1）取人羊膜組織刮除血塊、上皮細(xì)胞，沖洗后剪碎，然后用胰蛋白酶（或膠原蛋白酶）處理，去除細(xì)胞表面的糖蛋白，最終制成hAMSCs懸液．將細(xì)胞懸液放人培養(yǎng)瓶中進(jìn)行原代培養(yǎng)，當(dāng)細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)到一定階段時(shí)，出現(xiàn)接觸抑制現(xiàn)象，此時(shí)細(xì)胞停止分裂增殖，這時(shí)需要將細(xì)胞進(jìn)行相關(guān)處理，然后進(jìn)行傳代培養(yǎng)．
（2）10代以?xún)?nèi)的細(xì)胞可以保持正常的二倍體核型，因此傳至第 3 代的hAMSCs能保持細(xì)正常的（二倍體）核型．細(xì)胞分化的實(shí)質(zhì)是基因的選擇性表達(dá)，因此要檢測(cè) hAMSCs 是否分化成胰島 B 細(xì)胞，在誘導(dǎo)分化培養(yǎng)15天后，可提取細(xì)胞的RNA（或mRNA），用胰島素基因探針進(jìn)行分子雜交．
（3）從圖中可以推測(cè)，免疫原性的生主要與抗體的C區(qū)有關(guān)．構(gòu)建的人鼠嵌合抗體基因表達(dá)載體除了標(biāo)記基因和目的基因外，還有啟動(dòng)子、終止子．
（4）把大鼠肝腫瘤細(xì)胞和小鼠成纖維細(xì)胞融合成雜交瘤細(xì)胞，這些細(xì)胞既保持了合成大鼠肝細(xì)胞3種特異蛋白的能力，也合成了小鼠肝細(xì)胞這3種蛋白，但是在正常的小鼠成纖中從不合成這些．由此可見(jiàn)，融合實(shí)驗(yàn)證明了小鼠成纖維細(xì)胞含有不表達(dá)的但肝細(xì)胞專(zhuān)一表達(dá)的基因，在特定條件下這些“閑置基因”也可表達(dá)．
故答案為：
（1）（糖）蛋白   細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)、接觸抑制現(xiàn)象
（2）（二倍體）核型    RNA（或mRNA）
（3）C  啟動(dòng)子、終止子
（4）含有不表達(dá)的但肝細(xì)胞專(zhuān)一表達(dá)的基因，在特定條件下這些“閑置基因”也可表達(dá)

點(diǎn)評(píng) 本題結(jié)合圖解，考查蛋白質(zhì)工程、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)等知識(shí)，要求考生識(shí)記蛋白工程的概念及過(guò)程；識(shí)記動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的過(guò)程及條件，能結(jié)合圖中信息準(zhǔn)確判斷各選項(xiàng)，屬于考綱識(shí)記和理解層次的考查．