Question

基因工程的基本步驟中，首先是要獲得足夠多的目的基因．下圖示意采用“鳥槍法”擴(kuò)增目的基因，獲取目的基因的大致過程如圖．請(qǐng)據(jù)圖回答下列問題：

（1）過程①要對(duì)供體細(xì)胞所有 DNA使用

 

酶，這樣得到的DNA片段中含有或不含有

 

．
（2）過程②所得到的質(zhì)粒是一種小型

 

，它可以在細(xì)胞內(nèi)獨(dú)立復(fù)制，一般來說它所表達(dá)的產(chǎn)物

 

細(xì)胞生存所必需的．
（3）過程③需要使用與①相同的

 

酶及

 

酶，才能將質(zhì)粒與供體細(xì)胞DNA片段重組．
（4）過程④往往要用氯化鈣處理細(xì)胞，以增大

 

的通透性，有利于

 

．此外，還要在細(xì)菌培養(yǎng)基中加入

 

，這類培養(yǎng)基屬于

 

，能在此培養(yǎng)基上生存并增殖的細(xì)菌就是接受了重組質(zhì)粒的細(xì)菌．
（5）重組質(zhì)粒在宿主細(xì)胞中大量復(fù)制，就會(huì)使

 

．然后，在過程⑤中進(jìn)一步篩選、分離，得到大量含目的基因的質(zhì)粒．
（6）過程⑥需要將重組質(zhì)粒上的目的基因分離純化出來，首先可用

 

過程中曾使用過的那種

 

酶，將目的基因與原質(zhì)粒部分分割開，然后可用

 

等適當(dāng)方法得到純化的目的基因DNA片段．

Answer 1

考點(diǎn)：基因工程的原理及技術(shù)

專題：

分析：分析題圖：圖示表示采用“鳥槍法”擴(kuò)增目的基因，獲取目的基因的大致過程，其中①表示用限制酶切割DNA；②表示從細(xì)菌中獲取質(zhì)粒；③表示基因表達(dá)載體的構(gòu)建過程；④表示將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞；⑤表示重組質(zhì)粒在細(xì)菌中擴(kuò)增；⑥表示獲取大量的目的基因．

解答： 解：（1）①表示用限制性內(nèi)切酶對(duì)供體細(xì)胞所有DNA進(jìn)行切割，這樣得到的DNA片段中含有或不含有目的基因．
（2）質(zhì)粒是一種小型環(huán)狀DNA分子；一般來說，質(zhì)粒所表達(dá)的產(chǎn)物不是細(xì)胞生存所必需的．
（3）③表示基因表達(dá)載體的構(gòu)建過程，該過程首先需用同種限制酶切割含目的基因的DNA片段和質(zhì)粒，再用DNA連接酶將目的基因和運(yùn)載體連接形成重組質(zhì)粒．
（4）將目的基因?qū)�入�?xì)菌細(xì)胞采用感受態(tài)細(xì)胞法，即用氯化鈣處理細(xì)胞，以增大細(xì)菌細(xì)胞壁的通透性，有利于重組質(zhì)粒進(jìn)入細(xì)胞．此外，還要在細(xì)菌培養(yǎng)基中加入抗菌藥物，以便篩選出轉(zhuǎn)化細(xì)胞，因此這類培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基，能在此培養(yǎng)基上生存并增殖的細(xì)菌就是接受了重組質(zhì)粒的細(xì)菌．
（5）重組質(zhì)粒在宿主細(xì)胞中大量復(fù)制，就會(huì)使目的基因得到擴(kuò)增．
（6）過程⑥需要將重組質(zhì)粒上的目的基因分離純化出來，首先可用①③過程中曾使用過的那種限制性內(nèi)切酶，將目的基因與原質(zhì)粒部分分割開，然后可用離心分離等適當(dāng)方法得到純化的目的基因DNA片段．
故答案為：
（1）限制性內(nèi)切    目的基因
（2）環(huán)狀DNA分子    不是
（3）限制性內(nèi)切   DNA連接
（4）細(xì)菌細(xì)胞壁    重組質(zhì)粒進(jìn)入細(xì)胞    抗菌藥物    選擇培養(yǎng)基
（5）目的基因得到擴(kuò)增
（6）①③限制性內(nèi)切   離心分離

點(diǎn)評(píng)：本題結(jié)合圖解，考查基因工程的相關(guān)知識(shí)，要求考生識(shí)記基因工程的原理、工具及操作步驟，掌握各步驟中的相關(guān)細(xì)節(jié)，能正確分析題圖，再結(jié)合所學(xué)的知識(shí)準(zhǔn)確答題．