Question

19．“胰島素 A、B 鏈分別表達法”是生產胰島素的方法之一．圖1是該方法所用的基因表達載體，圖2表示利用大腸桿菌作為工程菌生產人胰島素的基本流程（融合蛋白A、B 分別表示β-半乳糖苷酶與胰島素 A、B鏈融合的蛋白）．請回答下列問題：

（1）圖1基因表達載體中沒有標注出來的基本結構是終止子．
（2）圖1中啟動子是RNA聚合酶識別和結合的部位，有了它才能啟動目的基因的表達；氨芐青霉素抗性基因的作用是作為標記基因，將含有重組質粒的大腸桿菌篩選出來．
（3）構建基因表達載體時必需的工具酶有限制酶和DNA連接酶．
（4）β-半乳糖苷酶與胰島素A鏈或B鏈融合表達，可將胰島素肽鏈上蛋白酶的切割位點隱藏在內部，推測其意義在于防止胰島素的A、B鏈被菌體內蛋白酶降解．
（5）PCR技術又稱多聚酶鏈式反應．該技術可在體外對目的基因進行大量擴增，其大致過程可概括為變性、復性、延伸．

Answer 1

分析 基因工程技術的基本步驟：
（1）目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫中獲取、利用PCR技術擴增和人工合成．
（2）基因表達載體的構建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等．
（3）將目的基因導入受體細胞：根據受體細胞不同，導入的方法也不一樣．將目的基因導入植物細胞的方法有農桿菌轉化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因導入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因導入微生物細胞的方法是感受態(tài)細胞法．
（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術；②檢測目的基因是否轉錄出了mRNA--分子雜交技術；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質--抗原-抗體雜交技術．個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．

解答 解：（1）根據題意和圖示分析可知：圖1基因表達載體中已有目的基因、啟動子和標記基因，所以沒有標注出來的基本結構是終止子．
（2）圖1中啟動子是RNA聚合酶酶識別和結合的部位，有了它才能啟動目的基因的表達即轉錄過程；氨芐青霉素抗性基因的作用是作為標記基因，將含有重組質粒的大腸桿菌篩選出來．
（3）構建基因表達載體時必需的工具酶有限制酶和DNA連接酶．
（4）β-半乳糖苷酶與胰島素A鏈或B鏈融合表達，可將胰島素肽鏈上蛋白酶的切割位點隱藏在內部，這樣可以防止胰島素的A、B鏈被菌體內蛋白酶降解．
（5）PCR技術又稱多聚酶鏈式反應．該技術可在體外對目的基因進行大量擴增，其大致過程可概括為變性、復性和延伸．
故答案為：
（1）終止子
（2）RNA聚合    作為標記基因，將含有重組質粒的大腸桿菌篩選出來
（3）限制酶和DNA連接酶
（4）防止胰島素的A、B鏈被菌體內蛋白酶降解
（5）多聚酶鏈式反應    變性   復性   延伸

點評 “胰島素 A、B 鏈分別表達法”是生產胰島素的方法之一．圖1是該方法所用的基因表達載體，圖2表示利用大腸桿菌作為工程菌生產人胰島素的基本流程（融合蛋白A、B 分別表示β-半乳糖苷酶與胰島素 A、B鏈融合的蛋白）．請回答下列問題