Question

【題目】動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)是其他動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)的基礎(chǔ)，請回答下列有關(guān)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的問題：

（1）在培養(yǎng)瓶中進(jìn)行動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，需兩次用到胰蛋白酶，第一次使用的目的是將組織分散成單個(gè)細(xì)胞，由于動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)具有_____、______現(xiàn)象，因此需第二次用該酶處理，然后分瓶培養(yǎng)。在培養(yǎng)過程中，應(yīng)定期更換培養(yǎng)液，目的是__________________。

（2）細(xì)胞正常培養(yǎng)了一段時(shí)間后，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞絕大部分死亡，只有極少數(shù)細(xì)胞存活，這是因?yàn)榇婊畹募?xì)胞發(fā)生了__________，可無限增殖。目前使用的或冷凍保存的正常細(xì)胞通常為___代以內(nèi)的細(xì)胞，以保持細(xì)胞正常的______核型。

（3）在單克隆抗體制備過程中，將獲得__________(答出兩個(gè)特點(diǎn))的雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行______培養(yǎng)和抗體檢測以后，再經(jīng)過多次篩選，可獲得足夠數(shù)量的能分泌所需抗體的細(xì)胞，將這些細(xì)胞在體外做大規(guī)模培養(yǎng)或注入小鼠腹腔內(nèi)增殖，從_______或_______中就可獲得大量的單克隆抗體。

Answer 1

【答案】貼壁生長 接觸抑制 清除代謝產(chǎn)物，防止細(xì)胞代謝產(chǎn)物積累對細(xì)胞自身造成危害 突變 10 二倍體 既能產(chǎn)生特異性抗體，又能無限增殖 克隆化 細(xì)胞培養(yǎng)液 小鼠腹水

【解析】

1、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的流程:取動(dòng)物組織塊(動(dòng)物胚胎或幼齡動(dòng)物的器官或組織) →剪碎→用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理分散成單個(gè)細(xì)胞→制成細(xì)胞懸液→轉(zhuǎn)入培養(yǎng)瓶中進(jìn)行原代培養(yǎng)→貼滿瓶壁的細(xì)胞重新用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理分散成單個(gè)細(xì)胞繼續(xù)傳代培養(yǎng)。

2、動(dòng)物培養(yǎng)條件：

（1）無菌、無毒的環(huán)境：①消毒、滅菌②添加一定量的抗生素③定期更換培養(yǎng)液，以清除代謝廢物。

（2）營養(yǎng)物質(zhì)：糖、氨基酸、促生長因子、無機(jī)鹽、微量元素等，還需加入血清、血漿等天然物質(zhì)。

（3）溫度和PH。

（4）氣體環(huán)境：95%空氣(細(xì)胞代謝必需的)和5%的CO2 (維持培養(yǎng)液的PH)。

單克隆抗體的制備過程是：對小動(dòng)物注射抗原，從該動(dòng)物的脾臟中獲取效應(yīng)B細(xì)胞，將效應(yīng)B細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合，篩選出能產(chǎn)生單一抗體的雜交瘤細(xì)胞，克隆化培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞（體內(nèi)培養(yǎng)和體外培養(yǎng)），最后獲取單克隆抗體。

（1）由于正常動(dòng)物細(xì)胞具有貼壁生長和接觸抑制的特點(diǎn)，故培養(yǎng)到一定階段需要第二次用胰蛋白酶處理，然后分瓶培養(yǎng)。在培養(yǎng)過程中，需要清除代謝產(chǎn)物，防止細(xì)胞代謝產(chǎn)物積累對細(xì)胞自身造成危害，故需要定期更換培養(yǎng)液。

（2）細(xì)胞正常培養(yǎng)一段時(shí)間后，大部分死亡，極少數(shù)細(xì)胞存活，少數(shù)存活的細(xì)胞朝向癌細(xì)胞的方向發(fā)生了突變，可無限增殖。目前使用的或冷凍保存的正常細(xì)胞通常為10代以內(nèi)的細(xì)胞，以保持細(xì)胞正常的二倍體核型。

（3）在單克隆抗體制備過程中，將獲得既能產(chǎn)生特異性抗體，又能無限增殖的雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行克隆化培養(yǎng)和抗體檢測以后，再經(jīng)過多次篩選，可獲得足夠數(shù)量的能分泌所需抗體的細(xì)胞，將這些細(xì)胞在體外做大規(guī)模培養(yǎng)或注入小鼠腹腔內(nèi)增殖，從細(xì)胞培養(yǎng)液和小鼠腹水中就可獲得大量的單克隆抗體。