Question

【題目】紅細(xì)胞含有大量血紅蛋白，紅細(xì)胞的機(jī)能主要是由血紅蛋白完成，血紅蛋白的主要功能是攜帶氧氣或二氧化碳，我們可以選用豬、牛、羊或其它脊椎動物的血液進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，來提取和分離血紅蛋白，請回答下列有關(guān)問題：

（1）血紅蛋白提取和分離的程序可分為四步：樣品處理、_________________、______________和__________________。

（2）樣品處理包括紅細(xì)胞的洗滌、______________、__________________和________________________四步。紅細(xì)胞洗滌次數(shù)不能過少，否則________________________；離心速度_______和時(shí)間______會使白細(xì)胞等一同沉淀，達(dá)不到分離的效果。

（3）凝膠色譜柱在裝填過程中，凝膠充分溶脹后，配成凝膠懸浮液，在色譜柱下端的尼龍管的螺旋夾________的情況下，一次性緩慢倒入色譜柱內(nèi)，可輕輕地敲動色譜柱，使凝膠裝填均勻。

（4）圖是樣品的加入與洗脫示意圖，從圖中可以看出，正確的加樣操作是用吸管小心將透析后的樣品________________________加樣，正確的操作次序是________________________。

Answer 1

【答案】粗分離 純化 純度鑒定 血紅蛋白的釋放 分離血紅蛋白溶液 透析 無法除去血漿蛋白 過高 過長 打開 貼著管壁 ③①④②

【解析】

血紅蛋白的提取與分離的實(shí)驗(yàn)步驟主要有：
（1）樣品處理：①紅細(xì)胞的洗滌（低速短時(shí)間離心），②血紅蛋白的釋放（需要加入蒸餾水和甲苯），③分離血紅蛋白（中速長時(shí)間離心）．
（2）粗分離：①分離血紅蛋白溶液，②透析．
（3）純化：調(diào)節(jié)緩沖液面→加入蛋白質(zhì)樣品→調(diào)節(jié)緩沖液面→洗脫→收集分裝蛋白質(zhì)．
（4）純度鑒定--SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳．

（1）血紅蛋白提取和分離步驟：樣品處理、粗分離、純化和純度鑒定．

（2）樣品處理又包括紅細(xì)胞洗滌、血紅蛋白釋放、分離血紅蛋白溶液和透析四步．洗滌紅細(xì)胞的目的是去除雜蛋白，以利于后續(xù)步驟的分離純化，如果紅細(xì)胞洗滌次數(shù)過少，無法除去血漿蛋白，離心速度過高和時(shí)間過長會使白細(xì)胞等一同沉淀，達(dá)不到分離的效果．

（3）凝膠色譜柱的裝填:裝填前，凝膠用蒸餾水或洗脫液充分溶脹，配成凝膠懸浮液。然后在與色譜柱下端連接的尼龍管螺旋夾打開的情況下，將凝膠懸浮液一 次性緩慢倒入色譜柱內(nèi)。裝填時(shí)，要均勻，不留氣泡，如果發(fā)現(xiàn)氣泡，必須重裝。 裝填完后，用300 mL 20 mmol/L的磷酸 緩沖液充分洗滌平衡凝膠12小時(shí)，使其裝填緊密。

（4）從圖中可以看出，正確的加樣操作是用吸管小心將透析后的樣品貼著管壁加樣，正確的加樣順序可依據(jù)樣品在色譜柱及凝膠層中的滲入量進(jìn)行分析，即調(diào)節(jié)緩沖液面→加入蛋白質(zhì)樣品→調(diào)節(jié)緩沖液面→洗脫→收集分裝蛋白質(zhì)，可以得出正確的操作次序③①④②．