Question

【題目】幽門螺桿菌（Hp）感染是急慢性胃炎和消化道潰瘍的主要致病因素，其不良預(yù)后是胃癌。據(jù)研究發(fā)現(xiàn)，目前我國有超過50%人感染了Hp病菌。Hp是微需氧菌，環(huán)境氧要求5%～8%，在大氣或絕對(duì)厭氧環(huán)境下均能生長，Hp的尿素酶極為豐富，尿素酶催化尿素水解形成“氨云”保護(hù)細(xì)菌在高酸環(huán)境下生存。在患者體內(nèi)采集樣本并制成菌液后，進(jìn)行分離培養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)基本步驟如下：配制培養(yǎng)基→滅菌、倒平板→X→培養(yǎng)→觀察。請(qǐng)回答：

（1）在配制培養(yǎng)基時(shí)，要加入尿素和________________指示劑，這是因?yàn)?/span>Hp能以尿素作為氮源；若有Hp，則菌落周圍會(huì)出現(xiàn)紅色環(huán)帶。

（2）步驟X的操作如圖所示：

①圖中所用微生物接種的方法是__________________________。

②圖示每次取樣前需用手指輕壓移液管上的橡皮頭，吹吸三次，目的是_______________。

③下列關(guān)于此實(shí)驗(yàn)的操作，正確的是____________。

A．高壓蒸汽滅菌加熱結(jié)束時(shí)，打開放氣閥使壓力表指針回到零后，開啟鍋蓋

B．含酚紅指示劑的尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基滅菌后，冷卻至室溫倒平板

C．取103、104、105倍的稀釋液和無菌水各0．1mL，分別涂布于各組平板上

D．在皿蓋上用記號(hào)筆做標(biāo)記

（3）在培養(yǎng)時(shí)，需將培養(yǎng)皿_____并放在恒溫培養(yǎng)箱中，否則將可能導(dǎo)致無法形成單一菌落。

（4）臨床上14C呼氣試驗(yàn)檢測是一種安全、準(zhǔn)確的檢測Hp的方法，其基本原理是當(dāng)被檢測者服用含有_________________的膠囊后，如患者的胃內(nèi)存在Hp感染，則可將其分解為氨和14CO2。

（5）某同學(xué)將分離得到的Hp擴(kuò)大培養(yǎng)，對(duì)其進(jìn)行計(jì)數(shù)。取1 mL菌液稀釋106倍后再各取0．1 mL分別涂布在3個(gè)培養(yǎng)基上，培養(yǎng)一段時(shí)間后，其菌落數(shù)分別為180、220、200個(gè)，則每升菌液中Hp的數(shù)量_________個(gè)，此方法測定的活菌數(shù)比實(shí)際活菌數(shù)少的原因?yàn)?/span>________________。

Answer 1

【答案】酚紅指示劑 稀釋涂布平板法 使微生物和無菌水混合均勻 C 倒置 14C標(biāo)記尿素 2×1012 當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上只能觀察到一個(gè)菌落

【解析】

微生物的研究通常包含微生物的獲得、分離純化、培養(yǎng)以及保存等。單菌落分離法包含劃線分離法和涂布分離法，常用于分離獲得單菌落。通常是細(xì)菌在固體培養(yǎng)基上（內(nèi)）生長發(fā)育，形成以母細(xì)胞為中心的一團(tuán)肉眼可見的、有一定形態(tài)、構(gòu)造等特征的子細(xì)胞的集團(tuán)，稱之為菌落。

（1）由于Hp含有尿素酶，尿素酶能將尿素分解成氨，而氨會(huì)使培養(yǎng)基堿性增強(qiáng)，即pH升高，導(dǎo)致酚紅指示劑變紅。

（2）①微生物接種的方法很多，但都要注意防止雜菌的污染；接種微生物常用平板劃線法和稀釋涂布平板法，圖示所示為稀釋涂布平板法。

②圖示每次取樣前需用手指輕壓移液管上的橡皮頭，吹吸三次，目的是使微生物和無菌水混合均勻。

③A、高壓蒸汽滅菌加熱結(jié)束時(shí)，等待壓力表指針回到零后，才能開啟鍋蓋，不能打開放氣閥使壓力表指針回到零，A錯(cuò)誤；

B、含酚紅指示劑的尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基滅菌后，冷卻至50℃左右倒平板，不需要冷卻到室溫，B錯(cuò)誤；

C、取103、104、105倍的稀釋液和無菌水各0．1mL，分別涂布于各組平板上，C正確；

D、用記號(hào)筆標(biāo)記培養(yǎng)皿中的菌落時(shí)，應(yīng)標(biāo)記在皿底上，D錯(cuò)誤。

故選C。

（3）在培養(yǎng)時(shí)，需將培養(yǎng)皿倒置并放在恒溫培養(yǎng)箱中，倒置培養(yǎng)基的目的也是為了獲得單一菌落。

（4）如果人感染了Hp，能將尿素分解為NH3和CO2，因而用14C標(biāo)記尿素中的C，可通過呼吸產(chǎn)物來判斷是否感染Hp。

（5）1 L菌液中Hp的數(shù)量=（180+220+200）÷3÷0．1×106×103=2×1012（個(gè)）；用稀釋涂布平板法統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目低的原因是當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察到的只是一個(gè)菌落。