Question

【題目】轉(zhuǎn)基因生物培育成功的關(guān)鍵是保證目的基因在受體中的正常表達(dá)或抑制特定基因的表達(dá)。在這個(gè)過程中，根據(jù)獲得的目的基因不同、采取的措施不同等，培育時(shí)選擇的方法也不相同。回答下列相關(guān)問題：

（1）利用乳腺生物反應(yīng)器獲得胰島素的過程中，為保證通過反轉(zhuǎn)錄法獲得的胰島素基因能正常表達(dá)，在構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)需將獲得的含目的基因的片段連接在__________之間，然后通過_________的方法將基因表達(dá)載體導(dǎo)入__________________中。

（2）為降低耐除草劑轉(zhuǎn)基因水稻通過花粉傳播而引起的環(huán)境生物安全問題，一是利用轉(zhuǎn)入的耐除草劑基因的位置進(jìn)行控制，如__________________；二是將耐除草劑基因拆分為兩部分，只有兩部分片段同時(shí)存在才具有耐除草劑的特性，請(qǐng)?zhí)岢隹尚械拇胧��?/span>____________________________________。

（3）下圖中插入顛倒的轉(zhuǎn)錄區(qū)的目的是__________________，其原理可能是顛倒的轉(zhuǎn)錄區(qū)與轉(zhuǎn)錄區(qū)形成的RNA通過_________原則形成雙鏈而無法使轉(zhuǎn)錄區(qū)形成的RNA與核糖體結(jié)合。

Answer 1

【答案】（乳腺蛋白基因的）啟動(dòng)子和終止子 顯微注射 （發(fā)育為）雌性個(gè)體的受精卵 將耐除草劑基因?qū)�入到葉綠體中 將拆分后的基因分別導(dǎo)入不同的個(gè)體，獲得純合品系1和品系2，將兩者雜交獲得同時(shí)具有兩個(gè)片段的個(gè)體 抑制轉(zhuǎn)錄區(qū)基因的表達(dá) 堿基互補(bǔ)配對(duì)

【解析】

基因工程技術(shù)的基本步驟：

（1）目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成；

（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等；

（3）將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣．將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法；

（4）目的基因的檢測(cè)與鑒定：

分子水平上的檢測(cè)：①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)；

個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。

（1）在構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)需將獲得的含目的基因的片段連接在乳腺蛋白基因的啟動(dòng)子和終止子之間；將目的基因轉(zhuǎn)入動(dòng)物細(xì)胞通常采用顯微注射法，受體細(xì)胞通常是雌性個(gè)體的受精卵。

（2）為降低耐除草劑轉(zhuǎn)基因水稻通過花粉傳播而引起的環(huán)境生物安全問題，一種方法是可以將將耐除草劑基因?qū)�入到葉綠體中，形成的花粉就不含有目的基因；另一種方法是將耐除草劑基因拆分為兩部分，只有兩部分片段同時(shí)存在才具有耐除草劑的特性，具體措施將拆分后的基因分別導(dǎo)入不同的個(gè)體，獲得純合品系1和品系2，將兩者雜交獲得同時(shí)具有兩個(gè)片段的個(gè)體。

（3）在啟動(dòng)子后插入顛倒的轉(zhuǎn)錄區(qū)可以抑制基因的表達(dá)；顛倒的轉(zhuǎn)錄區(qū)與轉(zhuǎn)錄區(qū)形成的RNA二者通過堿基互補(bǔ)配對(duì)的原則形成雙鏈從而抑制翻譯過程。