Question

【題目】胚胎干細(xì)胞（ES細(xì)胞）介導(dǎo)法是轉(zhuǎn)基因動(dòng)物培育的途徑之一，請(qǐng)據(jù)下圖綠色熒光蛋白老鼠的培育流程回答相關(guān)問題：

（1）胚胎干細(xì)胞是由早期胚胎或原始性腺中分離出來的一類細(xì)胞，在形態(tài)上，表現(xiàn)為_________，在體外培養(yǎng)的條件下具有__________的特點(diǎn)。

（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建是基因工程的核心步驟，此過程中常用到的酶是__________。將修飾后的綠色熒光蛋白基因?qū)�人ES細(xì)胞常采用的方法是__________；培養(yǎng)過程中，ES細(xì)胞所需的氣體主要有02和C02，其中02是__________，C02用來維持培養(yǎng)液的pH值。

（3）為檢測(cè)ES細(xì)胞的染色體上是否含有綠色熒光蛋白基因，在分子水平上可采用的方法是__________；圖中④過程中要將含外源基因的ES細(xì)胞導(dǎo)人囊胚的__________。將得到的重組胚胎導(dǎo)入⑤體內(nèi)，其存活的基礎(chǔ)是__________。

Answer 1

【答案】細(xì)胞體積小、細(xì)胞核大、核仁明顯 可以增殖而不發(fā)生分化 限制酶和DNA連接酶 顯微注射法（技術(shù)） 細(xì)胞代謝必需的 DNA分子雜交 內(nèi)細(xì)胞團(tuán) 受體子宮對(duì)外來胚胎不發(fā)生免疫排斥反應(yīng)

【解析】

基因工程技術(shù)的基本步驟：目的基因的獲取→基因表達(dá)載體的構(gòu)建（核心）→將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞（將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法）→目的基因的檢測(cè)與鑒定（包括分子水平上的檢測(cè)：①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)；個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等）。

動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的條件：無菌、無毒的環(huán)境；一定的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)；溫度和PH；氣體環(huán)境：即95%空氣（細(xì)胞代謝必需的）和5%的CO2（維持培養(yǎng)液的PH）。

胚胎干細(xì)胞簡(jiǎn)稱ES或EK細(xì)胞，來源于早期胚胎或原始性腺（即囊胚期的內(nèi)細(xì)胞團(tuán)）．胚胎干細(xì)胞具有胚胎細(xì)胞的特性，體積較小，細(xì)胞核大，核仁明顯；在功能上，具有發(fā)育的全能性，可分化為成年動(dòng)物任何一種組織細(xì)胞．另一方面，在體外培養(yǎng)條件下，ES細(xì)胞可不斷增殖而不發(fā)生分化，可進(jìn)行冷凍保存，也可以進(jìn)行某些遺傳改造。

（1）胚胎干細(xì)胞（ES細(xì)胞）是由早期胚胎或原始性腺中分離出來的一類細(xì)胞，在形態(tài)上，表現(xiàn)為細(xì)胞體積小、細(xì)胞核大、核仁明顯；在功能上具有發(fā)育的全能性。在體外培養(yǎng)的條件下具有可以增殖而不發(fā)生分化的特點(diǎn)。

（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建是基因工程的核心，常常用到的工具酶有限制酶和DNA連接酶。將修飾后的目的基因（綠色熒光蛋白基因）導(dǎo)入動(dòng)物受體細(xì)胞（ES細(xì)胞）常采用的方法是顯微注射法；動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，需要一定的氣體環(huán)境（95%的空氣和5%的CO2），其中氧氣是細(xì)胞代謝所必須的，CO2是維持培養(yǎng)液的pH。

（3）為檢測(cè)ES細(xì)胞的染色體上是否含有綠色熒光蛋白基因，在分子水平上可采用的方法是DNA分子雜交法；圖中④過程中要將含外源基因的ES細(xì)胞導(dǎo)入囊胚的內(nèi)細(xì)胞團(tuán)，因?yàn)橹挥袃?nèi)細(xì)胞團(tuán)的細(xì)胞才發(fā)育為后代的組織器官。將得到的重組胚胎導(dǎo)入⑤的子宮內(nèi)，其存活的基礎(chǔ)是受體子宮對(duì)外來胚胎不發(fā)生免疫排斥反應(yīng)。