Question

【題目】（四）生物工程

圖1是科學(xué)家用轉(zhuǎn)基因（大鼠生長激素基因）方法培育“巨型小鼠”過程中的一個步驟。圖2為3種質(zhì)粒和1個含目的基因的DNA片段，其中Ap為氨芐青霉素抗性基因，Tc為四環(huán)素抗性基因，lacZ為藍色顯色基因，都可以作為標(biāo)記基因。復(fù)制原點是質(zhì)粒上必需的一段復(fù)制起始的序列，與重組質(zhì)粒的自主復(fù)制有關(guān)。

【1】圖1表示基因工程中的________（步驟），該步驟采用的技術(shù)方法是________。

【2】據(jù)圖2，為構(gòu)建重組質(zhì)粒，應(yīng)使用限制酶________（Pvu Ⅰ / EcoR Ⅰ）進行切割。其中，質(zhì)粒A、質(zhì)粒C不能作為此目的基因運載體的原因是________。

【3】在分離提純限制酶EcoR Ⅰ的過程中，能使EcoR Ⅰ沉淀的方法是________。

A. 溶菌酶等酶解細菌細胞壁

B. 超聲波、壓力等

C. 改變pH或加入硫酸銨

D. 添加穩(wěn)定劑和填充劑

【4】研究人員用交聯(lián)法固定化EcoR Ⅰ，用戊二醛作為交聯(lián)劑，使酶交聯(lián)在一起，限制酶的移動，如圖3所示。但發(fā)現(xiàn)固定化后的EcoR Ⅰ的活性比未固定化的要低，其最可能的原因是戊二醛________。

A. 增加了酶的分子量

B. 改變了部分酶的活性部位的空間結(jié)構(gòu)

C. 占據(jù)了酶的活性部位

D. 分解了部分的酶

Answer 1

【答案】

【1】重組DNA分子導(dǎo)入受體細胞顯微注射法

【2】Pvu I質(zhì)粒A缺少標(biāo)記基因；質(zhì)粒C在用與目的基因相同的限制酶切割時，復(fù)制原點會被限制酶切割，從而影響重組質(zhì)粒的自主復(fù)制

【3】C

【4】D

【解析】基因工程四部曲為：獲取目的基因（從基因組文庫中獲取或、利用PCR技術(shù)擴增目的基因）；基因表達載體的構(gòu)建（這也是基因工程的核心）；將目的基因?qū)�入受體細胞（植物、動物、微生物）；目的基因的檢測與鑒定 （DNA分子雜交技術(shù),分子雜交技術(shù)、抗原抗體雜交）。

【1】據(jù)圖分析，圖1表示用顯微注射法將重組DNA導(dǎo)入受體細胞的過程。

【2】分析題圖可以發(fā)現(xiàn)，要想構(gòu)建基因表達載體，必須使用限制酶PvuⅠ對于目的基因進行切割；質(zhì)粒A中沒有標(biāo)記基因，質(zhì)粒C中限制酶PvuⅠ的切割部位在復(fù)制圓點內(nèi)部，會破壞質(zhì)粒的功能，影響重組質(zhì)粒的自主復(fù)制，因此質(zhì)粒A、質(zhì)粒C不能作為此目的基因運載體。

【3】在分離提純限制酶EcoR Ⅰ的過程中，能使EcoR Ⅰ沉淀的方法是改變pH或加入硫酸銨，故選C。

【4】用戊二醛作為交聯(lián)劑，使酶交聯(lián)在一起，限制酶的移動，結(jié)果發(fā)現(xiàn)固定化后的EcoR Ⅰ的活性比未固定化的要低，可能的原因是戊二醛分解了部分的酶，故選D。