Question

【題目】乳糖酶能夠催化乳糖水解為葡萄糖和半乳糖，具有重要應(yīng)用價(jià)值。乳糖酶的制備及固定化步驟如下：

產(chǎn)乳糖酶微生物L的篩選→產(chǎn)乳糖酶微生物L的培養(yǎng)→乳糖酶的提取純化→乳糖酶的固定化

（1）表的培養(yǎng)液pH均為7．0，若要篩選微生物L，則不能選擇表中的___________培養(yǎng)液。

培養(yǎng)液	乳糖	乳糖酶	NaNO2	牛肉膏	K2HPO4	KCl	MgS4O7H2O	FeSO4
A	25g/L				1g/L	0．5g/L	1g/L	0．01g/L
B			3g/L		1g/L	0．5g/L	1g/L	0．01g/L
C	25g/L	1ug/L		3g/L	1g/L	0．5g/L	1g/L	0．01g/L
D	span>25g/L		3g/L		1g/L	0．5g/L	1g/L	0．01g/L

（2）為了獲得能產(chǎn)乳糖酶的微生物L的單菌落，可采用________法將初篩菌液接種在固體培養(yǎng)基上。

（3）擴(kuò)大培養(yǎng)微生物L時(shí)，通過(guò)不斷增加營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的比例________（可以/不可以）提高種群密度，分析說(shuō)明原因________________________。

（4）常用____________________法固定化乳糖酶。在建立和優(yōu)化乳糖酶固定化酶柱時(shí)，優(yōu)化酶反應(yīng)時(shí)間可通過(guò)___________來(lái)調(diào)節(jié)。

（5）下圖是溫度對(duì)乳糖酶的固化酶和游離酶活力的影響曲線，該曲線表明固化酶和游離酶的最適溫度___________(從相同或不同選填)；低于或高于最適溫度時(shí)，固化酶的酶活力___________(從低于、等于或高于選填)游離酶。

Answer 1

【答案】ABC 平板劃線法或稀釋涂布平板 不可以 擴(kuò)大培養(yǎng)的液體培養(yǎng)基由于營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)濃度增高，滲透壓也增高，不利于細(xì)菌生長(zhǎng) 物理吸附法或化學(xué)結(jié)合 控制（反應(yīng)物）液體流速 相同 高于

【解析】

1、微生物的營(yíng)養(yǎng)：碳源、氮源、水和無(wú)機(jī)鹽；

2、微生物的接種方法：平板劃線法和稀釋涂布平板法；

3、從曲線圖中固化酶和游離酶的最適溫度重合，即二者的最適溫度相同。低于或高于最適溫度時(shí)，固化酶的酶活力均高于游離酶。

（1）分析題干信息可知，該實(shí)驗(yàn)的目的是篩選微生物L，因此所用的培養(yǎng)基應(yīng)該是乳糖作為唯一碳源的培養(yǎng)基，且培養(yǎng)基的基本成分應(yīng)包括碳源，氮源、水和無(wú)機(jī)鹽，分析表格中的培養(yǎng)基的成分可知，D符合微生物L的培養(yǎng)要求，A培養(yǎng)基缺乏氮源，微生物不能生長(zhǎng)；B沒有碳源，微生物應(yīng)為無(wú)法生長(zhǎng)；C不是以乳糖為唯一碳源，牛肉膏也可以作為碳源，因此A、B、C不能用于對(duì)篩選微生物L的培養(yǎng)基。

故選ABC。

（2）為了獲得能產(chǎn)乳糖酶的微生物L的單菌落，接種微生物時(shí)常用平板劃線法或稀釋涂布法，可將初篩菌液接種在固體培養(yǎng)基上。

（3）擴(kuò)大培養(yǎng)的液體培養(yǎng)基由于營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)濃度增高，滲透壓也增高，不利于細(xì)菌生長(zhǎng)，故擴(kuò)大培養(yǎng)微生物L時(shí)，不能通過(guò)增加營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的比例提高種群密度。

（4）與細(xì)胞相比，酶的分子量較小，常用物理吸附法或化學(xué)結(jié)合法固定化乳糖酶。在建立和優(yōu)化乳糖酶固定化酶柱時(shí)，優(yōu)化酶反應(yīng)時(shí)間可通過(guò)控制（反應(yīng)物）液體流速來(lái)調(diào)節(jié)。

（5）據(jù)圖分析可知，固化酶和游離酶的最適溫度重合，該曲線表明固化酶和游離酶的最適溫度相同；低于或高于最適溫度時(shí)，固化酶的酶活力均高于游離酶。