Question

【題目】下圖是培育表達人乳鐵蛋白的乳腺生物反應器的技術路線。圖中tetR表示四環(huán)素抗性基因，ampR表示氨芐青霉素抗性基因，BamHⅠ、HindⅢ、SmaⅠ表示三種限制酶。請據(jù)圖回答：

（1）從高表達人乳鐵蛋白的組織細胞中提取mRNA，通過______過程獲得cDNA，用于PCR擴增。

（2）圖中將人乳鐵蛋白基因插入載體，需用______限制酶同時酶切載體和人乳鐵蛋白基因。篩選含有重組載體的大腸桿菌，首先需要在含______的培養(yǎng)基上進行。

（3）能使人乳鐵蛋白基因在乳腺細胞中特異性表達的調控序列是_____（填字母代號）。

A．啟動子 B．tetR C．復制原點 D．ampR

（4）進行過程②之前，需用相應的激素處理代孕牛，使其處于______狀態(tài)。

（5）對早期胚胎進行切割，可獲得多個新個體，該種生殖方式屬于_____生殖。

（6）為檢測人乳鐵蛋白基因是否轉錄，可采用______技術。

Answer 1

【答案】逆轉錄 BamHⅠ和HindⅢ 氨芐青霉素 A 同期發(fā)情 無性生殖（克�。� （DNA—RNA）分子雜交

【解析】

分析題圖：圖示是培育表達人乳鐵蛋白的乳腺生物反應器的技術路線，包括基因表達載體的構建、將目的基因導入受體細胞、早期胚胎培養(yǎng)、胚胎移植等步驟，其中過程①是將重組質粒導入受體細胞；過程②需采用胚胎移植技術。

（1）以mRNA為模板合成DNA的過程稱為逆轉錄。
（2）外源DNA分子上含有限制酶BamHI、Hindlll、Smal的切割位點，其中限制酶Smal的切割位點位于目的基因上，所以獲取目的基因和構建基因表達載體時，應用限制酶HindⅢ和BamHI。用限制酶HindⅢ和BamHI切割質粒后，會破壞質粒上的四環(huán)素抗性基因，但不會破壞氨芐青霉素抗性基因，因此篩選含有重組載體的大腸桿菌首先需要在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上進行。
（3）啟動子是能使人乳鐵蛋白基因在乳腺細胞中特異性表達的調控序列，A正確。故選A。
（4）將目的基因導入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；進行胚胎移植前，需要用相應的激素處理代孕牛，使其處于同期發(fā)情狀態(tài)。
（5）來自同一個胚胎的后代具有相同的遺傳物質，因此胚胎分割可以看做動物無性繁殖或克隆的方法之一。
（6）檢測目的基因是否轉錄常用分子雜交技術。