Question

【題目】圖（a）中的三個(gè)DNA片段上依次表示出了EcoR I、BamH I和Sau3A I三種限制性?xún)?nèi)切酶的識(shí)別序列與切割位點(diǎn)，圖（b）為某種表達(dá)載體示意圖（載體上的EcoR I、Sau3A I的切點(diǎn)是唯一的）。

根據(jù)基因工程的有關(guān)知識(shí)，回答下列問(wèn)題：

（1）經(jīng)BamH I酶切割得到的目的基因可以與上述表達(dá)載體被____________酶切后的產(chǎn)物連接，理由是____________。

（2）若某人利用圖（b）所示的表達(dá)載體獲得了甲、乙、丙三種含有目的基因的重組子，如圖（c）所示。這三種重組子中，不能在宿主細(xì)胞中表達(dá)目的基因產(chǎn)物的有____________，不能表達(dá)的原因是____________。

（3）DNA連接酶是將兩個(gè)DNA片段連接起來(lái)的酶，常見(jiàn)的有____________和___________，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是____________。

Answer 1

【答案】 Sau3A I 兩種酶切割后產(chǎn)生的片段具有相同的黏性末端 甲和丙 甲中目的基因插入在啟動(dòng)子的上游，丙中目的基因插入在終止子的下游，兩者目的基因均不能轉(zhuǎn)錄 EcoliDNA連接酶 T4DNA連接酶 T4DNA 連接酶

【解析】試題分析：根據(jù)目的基因兩端的限制酶切點(diǎn)確定限制酶的種類(lèi)

①應(yīng)選擇切點(diǎn)位于目的基因兩端的限制酶；②不能選擇切點(diǎn)位于目的基因內(nèi)部的限制酶；③為避免目的基因和質(zhì)粒的自身環(huán)化和隨意連接，也可使用不同的限制酶切割目的基因和質(zhì)粒，但要確保質(zhì)粒上也有這兩種酶的切點(diǎn)。

（1）由于限制酶Sau3AⅠ與BamHⅠ切割后產(chǎn)生的片段具有相同的黏性末端，所以經(jīng)BamH I酶切割得到的目的基因可以與上述表達(dá)載體被Sau3AⅠ酶切后的產(chǎn)物連接。

（2）啟動(dòng)子是一段有特殊序列的DNA片段，它是RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位，有了它才能驅(qū)動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄出mRNA，最終獲得所需要的蛋白質(zhì)。終止子也是一段有特殊結(jié)構(gòu)的DNA短片段，相當(dāng)于一盞紅色信號(hào)燈，使轉(zhuǎn)錄在所需要的地方停止下來(lái)。在基因表達(dá)載體中，啟動(dòng)子應(yīng)位于目的基因的首端，終止子應(yīng)位于目的基因的尾端，這樣目的基因才能表達(dá)。而圖甲中目的基因插入在啟動(dòng)子的上游，丙中目的基因插入在終止子的下游，兩者目的基因均不能轉(zhuǎn)錄，所以都不能表達(dá)目的基因的產(chǎn)物。

（3）常見(jiàn)的DNA連接酶有EcoliDNA連接酶和T4DNA連接酶，其中T4DNA連接酶既能連接黏性末端又能連接平末端。