Question

【題目】人血清白蛋白(HSA)具有重要的醫(yī)用價(jià)值，只能從血漿中制備。下圖是以基因工程技術(shù)獲取重組HSA（rHSA）的兩條途徑。

（1）獲取HSA基因，首先需采集人的血液，提取__合成總cDNA，然后以cDNA為模板，采用 __技術(shù)擴(kuò)增HSA基因。下圖中箭頭表示一條引物結(jié)合模板的位置及擴(kuò)增方向，請(qǐng)用箭頭在方框內(nèi)標(biāo)出標(biāo)出另一條引物的位置及擴(kuò)增方向。

_______________

（2）啟動(dòng)子通常具有物種及組織特異性，構(gòu)建在水稻胚乳細(xì)胞內(nèi)特異表達(dá)rHSA的載體，需要選擇的啟動(dòng)子是__（填寫字母，單選）。

A．人血細(xì)胞啟動(dòng)子 B．水稻胚乳細(xì)胞啟動(dòng)子 C．大腸桿菌啟動(dòng)子 D．農(nóng)桿菌啟動(dòng)子

（3）利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化水稻受體細(xì)胞的過程中，需添加酚類物質(zhì)，其目的是__。

（4）人體合成的初始HSA多肽，需要經(jīng)過膜系統(tǒng)加工形成正確的空間結(jié)構(gòu)才能有活性。與途徑II相比，選擇途徑I獲取rHSA的優(yōu)勢(shì)是__。

（5）為證明rHSA具有醫(yī)用價(jià)值，須確認(rèn)rHSA與__的生物學(xué)功能一致。

Answer 1

【答案】總RNA（或mRNA） PCR B 吸引農(nóng)桿菌移向水稻受體細(xì)胞，有利于目的基因成功轉(zhuǎn)化 水稻是真核生物，具有膜系統(tǒng)，能對(duì)初始rHSA多肽進(jìn)行高效加工 HSA

【解析】

基因工程技術(shù)的基本步驟：

1、目的基因的獲取：方法有從基因文庫中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成。

2、基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等。

3、將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣．將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法。

4、目的基因的檢測與鑒定：（1）分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)．（2）個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。

（1）為獲取HSA基因，可通過反轉(zhuǎn)錄法，首先需采集人的血液，提取合成總cDNA，然后以cDNA為模板，采用PCR技術(shù)擴(kuò)增HSA基因．由于DNA兩條鏈?zhǔn)欠聪蚱叫械模瑥?fù)制時(shí)也是方向相反，如圖2中箭頭箭頭表示一條引物結(jié)合模板的位置及擴(kuò)增方向，則另一條引物位于另一條鏈的相反一端．如圖所示：。

（2）啟動(dòng)子通常具有物種及組織特異性，故若構(gòu)建在水稻胚乳細(xì)胞內(nèi)特異表達(dá)rHSA的載體，需要選擇的啟動(dòng)子是水稻胚乳細(xì)胞啟動(dòng)子。

（3）利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化水稻受體細(xì)胞的過程中，需添加酚類物質(zhì)，其目的是吸引農(nóng)桿菌移向水稻受體細(xì)胞，有利于目的基因成功轉(zhuǎn)化。

（4）由于大腸桿菌為原核生物，無生物膜系統(tǒng)，而水稻為真核生物，具有生物膜系統(tǒng)，故在人體合成的初始HSA多肽，與途徑Ⅱ相比，選擇途徑I獲取rHSA的優(yōu)勢(shì)是 水稻是真核生物，具有膜系統(tǒng)，能對(duì)初始rHSA多肽進(jìn)行高效加工。

（5）為證明rHSA具有醫(yī)用價(jià)值，需對(duì)基因工程的產(chǎn)物進(jìn)行鑒定，即確認(rèn)rHSA與HSA的生物學(xué)功能一致。