Question

下面是某研究小組開展的“豬血漿某白蛋白的提取及分子量測定”研究，請協(xié)助完成有關(guān)問題：

材料儀器：新鮮豬血、低速冷凍離心機(jī)、透析袋、電泳儀等。

化學(xué)試劑：pH為7.4的緩沖液、檸檬酸鈉、奈氏試劑(與NH反應(yīng)出現(xiàn)黃色或紅棕色沉淀)、飽和(NH4)2SO4溶液、生理鹽水等。

實(shí)驗(yàn)步驟：

（1）樣品獲�。合蛐迈r豬血中加入__________，靜置一段時(shí)間后取上層 。

（2）鹽析法粗提蛋白質(zhì)：

①向血漿中加入一定體積的飽和(NH4)2SO4溶液，使(NH4)2SO4的濃度達(dá)到50%，充分混合后靜置、離心，取沉淀物。

②向沉淀物中加入適量生理鹽水使之溶解，再向其中加入一定體積的飽和(NH4)2SO4溶液，使(NH4)2SO4的濃度達(dá)到33%，充分混合后靜置、離心，取沉淀物。

③重復(fù)步驟①、②2～3次，最后用生理鹽水將沉淀溶解即得粗提品。鹽析粗提“血漿某白蛋白”的主要原理是__________，重復(fù)步驟①、②的主要目的是__________。

（3）透析除鹽：將粗提品裝入透析袋，以pH為7.4的緩沖液作透析液，每隔4 h更換一次透析液，每次更換前利用奈氏試劑檢測透析液中NH的量。利用緩沖液作透析液的目的是__________。檢測中，若觀察到透析液__________時(shí)，即可終止透析。

（4）凝膠色譜法分離：透析后的樣品經(jīng)凝膠柱洗脫，獲得純凈血漿某白蛋白樣品。

（5）分子量測定：化學(xué)物質(zhì)SDS能使蛋白質(zhì)變性，解聚成單條肽鏈。在聚丙烯酰胺凝膠電泳中加入一定量的SDS，電泳遷移率完全取決于肽鏈的分子大小。下圖為本實(shí)驗(yàn)中用SDS—聚丙烯酰胺凝膠電泳鑒定血漿某白蛋白的結(jié)果。根據(jù)電泳結(jié)果，某同學(xué)得出“提取的血漿某白蛋白有兩條肽鏈”的結(jié)論，這種說法可靠嗎？理由是___________________________________________________________。

Answer 1

（1）(適量的)檸檬酸鈉 血漿

（2）③該血漿白蛋白在50%和33%的(NH4)2SO4溶液中溶解度低 除去更多的雜蛋白

（3）避免因pH變化對蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)造成破壞 不出現(xiàn)黃色或紅棕色沉淀

（5）不可靠，只能得出提取的血漿某白蛋白含有兩種大小不同的肽鏈，不一定是兩條

【解析】

試題分析：（1）為防止血液凝固，在采血容器中要預(yù)先加入抗凝劑檸檬酸鈉；靜置一段時(shí)間后取上層血漿。

（2）③鹽析粗提“血漿某白蛋白”的主要原理是該血漿白蛋白在50%和33%的(NH4)2SO4溶液中溶解度低；重復(fù)步驟①、②的主要目的是除去更多的雜蛋白。

（3）強(qiáng)酸、強(qiáng)堿、溫度過高都會使蛋白質(zhì)發(fā)生變性，利用緩沖液作透析液的目的是避免因pH變化對蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)造成破壞；檢測中，若觀察到透析液中不出現(xiàn)黃色或紅棕色沉淀時(shí)，即可終止透析。

（5）電泳的原理是利用待分離樣品中各種分子帶電性質(zhì)的差異以及分子的大小、形狀等的不同，使帶電分子產(chǎn)生不同的遷移速度，本實(shí)驗(yàn)只能判斷肽鏈的大小有兩種，而不能判斷其條數(shù)。

考點(diǎn)：本題考查“豬血漿某白蛋白的提取及分子量測定”實(shí)驗(yàn)的相關(guān)知識，意在考查考生具備驗(yàn)證簡單生物學(xué)事實(shí)的能力，并對實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象和結(jié)果進(jìn)行解釋、分析和處理的能力。