Question

【題目】苯酚是重要的化工原料，被廣泛應用于酚醛樹脂、煉油、焦碳、染料等的生產中，并成為這些工業(yè)廢水中的主要污染物。水溶液中的苯酚可被皮膚吸收而引起中毒，含酚廢水可使水中生物大量死亡。微生物作為廢水處理中活性污泥的主體，是有毒物質分解轉化的主要執(zhí)行者�；卮鹣铝袉栴}：

（1）欲選出高效分解苯酚的菌株，應從__________中取樣，接著在__________（填固體或液體）培養(yǎng)基中選擇培養(yǎng)，以增大高效分解苯酚菌的濃度。對培養(yǎng)基進行滅菌處理時，應采用__________法。

（2）某同學采用稀釋涂布平板法對高效分解苯酚的菌株進行計數，其原理是__________。

（3）在4個細菌培養(yǎng)基平板上，均接種稀釋倍數為103的稀釋液0．1mL，培養(yǎng)一段時間后，平板上長出的菌落數分別為：45、108、114和120，因此可得出1mL菌液中的活菌數為__________個。使用血細胞計數板計數時，為了區(qū)分活菌和死菌可采用臺盼藍染色，對活菌計數時應選擇視野中__________的細胞進行計數。

（4）微生物對苯酚的降解是在酶的參與下完成的，該酶經分離純化，可用SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳進行純度鑒定，該方法可使電泳遷移率完全取決于蛋白分子的大小，其原因是__________。

Answer 1

【答案】活性污泥??? 液體??? 高壓蒸汽滅菌??? 當樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落來源于樣品稀釋液中的一個活菌??? 1．14×106??? 不著色??? SDS能使蛋白質發(fā)生完全變性SDS能與蛋白質形成SDS-蛋白質復合物，掩蓋了不同蛋白質間的電荷差別???

【解析】

1.微生物培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、氮源、無機鹽，此外還要滿足微生物生長對pH、特殊營養(yǎng)物質以及氧氣的要求。對異養(yǎng)微生物來說，含C、N的化合物既是碳源，也是氮源，即有些化合物作為營養(yǎng)要素成分時并不是起單一方面的作用。

2.微生物常見的接種的方法

①平板劃線法：將已經熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)。在線的開始部分，微生物往往連在一起生長，隨著線的延伸，菌數逐漸減少，最后可能形成單個菌落。

②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經過大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經培養(yǎng)后可形成單個菌落。

（1）由題干中的信息微生物作為廢水處理中活性污泥中取樣，用液體培養(yǎng)基進行選擇培養(yǎng)，以增大高效分解苯酚菌的濃度，對培養(yǎng)基進行滅菌處理的方法為高壓蒸汽滅菌法。

（2）采用稀釋涂布平板法對高效分解苯酚的菌株進行計數的原理是當樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落來源于樣品稀釋液中的一個活菌。

（3）統(tǒng)計的4個平板中要舍棄菌落數為45的平板，因其與其他3個平板的差異太大可能是由于實驗過程中操作不當導致的，其余3個平板的平均數是114，由此推出1mL菌液中的活菌數為1.14×106，為了區(qū)分活菌和死菌可采用臺盼藍染色，對活菌計數時應選擇視野中不著色的細胞進行計數，因為不著色的菌為活菌。

（4）用SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳進行純度鑒定，該方法可使電泳遷移率完全取決于蛋白分子的大小的原因是：SDS能使蛋白質發(fā)生完全變性：SDS能與蛋白質形成SDS-蛋白質復合物，掩蓋了不同蛋白質間的電荷差別；只有在這種情況下，才可使電泳遷移率完全取決于蛋白分子質量的大小。