Question

【題目】PCR擴增時，引物的設計和退火溫度的設定是非常重要的。下列有關敘述正確的是

A. 為方便構建重組質粒，在引物中需要增加適當的限制酶切位點

B. 設計引物時，若引物長度過短，則引物與模板鏈結合的特異性較差

C. 若退火溫度過高，則會破壞引物與模板的堿基互補配對

D. 長度相同但GC含量高的引物需要設定的退火溫度較低

Answer 1

【答案】ABC

【解析】

PCR全稱為聚合酶鏈式反應，是一項在生物體外復制特定的DNA片段的核酸合成技術，利用的原理是DNA復制，需要條件有模板DNA、四種脫氧核苷酸、一對引物、熱穩(wěn)定DNA聚合酶（Taq酶），過程包括：①高溫變性：DNA解旋過程（PCR擴增中雙鏈DNA解開不需要解旋酶，高溫條件下氫鍵可自動解開）；②低溫復性：引物結合到互補鏈DNA上；③中溫延伸：合成子鏈。

A. 獲得目的基因后一般需要將目的基因連接到質粒上，在引物上加酶切位點可以使后續(xù)的連接過程簡單、可控，A正確；

B. 特異性一般通過引物長度和退火溫度控制，若引物長度過短，則引物與模板鏈結合的特異性較差，B正確；

C. 退火的目的是讓引物與DNA模板靠堿基互補配對而形成部分雙鏈，溫度過高會使形成的部分雙鏈不穩(wěn)定，即“破壞引物與模板間的堿基對”，C正確；

D. C-G間氫鍵比A-T之間多，在相對較高的溫度下含CG數目較多時更容易成功，退火溫度低會增加產物的不確定性，D錯誤。